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抗血清制备的注意事项

发布时间:2020/5/8点击次数:52

    抗血清为含有某一类具有特异免疫功能的抗体分子的血清,一般为动物被人工注射某类抗原后制备的动物血清。高效价的抗血清用于研究工作以及疾病的诊断和治疗。

    一种抗原能否引起抗体生成反应,一方面取决于抗原分子表面有无抗原决定簇(Antigenic determinant),另一方面取决于机体的免疫状态,当具备以上两个条件后,抗体生成将遵循抗体生成的一般规律——初次反应和再次反应。

    抗原的种类繁多,包括天然的蛋白质抗原和细胞性抗原、合成性抗原以及基因工程抗原等,不同的抗原免疫动物具有不同的特殊性。一般完全抗原免疫动物需加用佐剂,尤其在使用可溶性抗原时,以期得到高效价的抗血清;合成性抗原和基因工程抗原等半抗原物质需先通过人工的方法与蛋白质载体连接后再与佐剂混合免疫动物,方可获得理想的免疫效果。使用佐剂后可增加抗原的免疫原性和延长抗原在机体内存留的时间,从而改变了抗原原有的免疫原性。其注意事项有如下几点:
 
    1、动物的免疫反应存在着个体差异,甚至有人报告不同品种动物一次免疫后产生的抗体的差别可高达500倍,所以制备抗血清时不能只免疫一只动物,一般最好免疫3~4只,因为有的动物可能产生抗体效价很低或不产生抗体,免疫反应好的动物所能提供的抗体往往高于一般动物3~4倍。
     2、制成的抗原乳剂是否为油包水乳剂应进行检查,否则会影响免疫效果,如不是油包水乳剂,应重新制备。
     3、要制备高效价的抗体,必须要加佐剂(一般采用完全福氏佐剂),加佐剂后免疫动物,抗体效价至少可增加5倍。但也应考虑到,如果抗原中有微量的杂蛋白存在,即使0.005mg,亦可因有佐剂而产生非特异性的抗体,所以要根据实验需要和抗原的纯度适当地使用佐剂。
     4、分装保存的抗血清应注明抗血清的名称,效价,制备日期以及包装量。
     5、当抗原量过少不易提纯时,可采用抗原抗体在琼脂扩散中形成的沉淀线直接免疫动物制备抗体。
     6、抗血清效价一般以抗血清稀释倍数表示。血清效价的检测方法很多,灵敏度各不同,因此在表示抗血清效价时,应标明检测方法。另外,在沉淀反应中,出现沉淀时的抗原、抗体比例有一较大的范围,如用不同浓度的抗原测定效价时,结果会因此有别,所以在测定抗血清效价时,需注意抗原的浓度。
     7、为制备单价特异性高的抗血清,所用抗原纯度越高越好,因此,在纯化抗原过程中应尽量除去可能存在的杂蛋白,这样可以省去许多时间来吸收抗血清中的非特异性抗体。
 


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